斜帶石斑魚，鱸形目鱸亞目鰭科石斑魚屬，我國主要分布于臺灣、廣東和海南沿海，常棲息于大陸沿岸和大島嶼沿岸，但在河口和離岸百米深的水域中也可發(fā)現(xiàn)。因其生長快、肉質(zhì)細(xì)嫩且味道鮮美而受到人們的青睞，是我國重要的海水養(yǎng)殖種類。

    近年來，對斜帶石斑魚多方面的研究取得了較大的成果，但研究的重點大多在溫度和鹽度等對斜帶石斑魚的生長性能、體成分和消化酶的影響，以及人工繁殖及苗種培育的工作上，對于多糖應(yīng)用于斜帶石斑魚的研究較少，其研究大多集中在中草藥對魚的影響上，但有關(guān)藻類多糖對于斜帶石斑魚的研究尚未見報道，基于此，研究在自制軟顆粒料時添加不同含量的海帶多糖，研究其對斜帶石斑魚胃腸道蛋白酶活性及腸道二糖酶活性的影響，探討其適宜的添加量及應(yīng)用的可行性，為開辟藻類多糖在海水養(yǎng)殖魚類飼料中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗魚飼養(yǎng)管理

    試驗魚為福建廈門小嶝水產(chǎn)養(yǎng)殖場人工培育的斜帶石斑魚幼魚，平均體質(zhì)量為 (90 ± 2. 6)g，體長為 (15 ±2. 25)cm。石斑魚魚苗運到福建省淡水水產(chǎn)研究所養(yǎng)殖試驗場地，放入暫養(yǎng)水桶中馴養(yǎng) 2周，用10 mg/kg 的土霉素溶液消毒，選取體格健壯且大小規(guī)格基本一致的個體，隨機(jī)放入8 個 150 L 的水族箱中，每組 2缸，每缸 15 尾魚，每缸配備一臺小循環(huán)過濾器來凈化水體，稱量初始體質(zhì)量后開始試驗。

    每天早上 08:00 ～08:30 和下午 17:00 ～17:30定時投喂，每次達(dá)到表觀飽食后停止投喂。每天檢測水質(zhì)情況，清洗小循環(huán)過濾器，每周清洗水缸，并用土霉素消毒。試驗用水為一級過濾海水，避光飼養(yǎng)，用增氧機(jī)晝夜持續(xù)增氧，每次投喂 1 h 后吸出糞便，每天傍晚換水約 1/3 ～1/2，以保持水質(zhì)清新。試驗期間，水溫 24 ～30 ℃，pH (8. 0 ±0. 3)，溶氧質(zhì)量濃度 ＞ 7. 0 mg/L，氨氮質(zhì)量濃度 ＜ 0. 2 mg/L。試驗期 48 d。

1.2 試驗期日糧的配制

    在粉料中分別添加 0、0. 5%、1. 0% 和 1. 5% 海帶粗多糖 ，飼料配方見表 1，分別設(shè)為對照組 (CK 組)、0. 5% 組(F1 組)、1. 0% 組 (F2 組) 和 1. 5% 組 (F3 組)。各組飼料原料混勻后制成 4 mm 粒徑的軟顆粒料，之后分裝入自封袋，置于 4 ℃冰箱冷藏備用，軟顆粒料每3 d 制作一次，3 d 剩下的飼料棄去，用新料投喂。

1.3 樣品采集

    試驗結(jié)束后，禁食 24 h，每缸魚整體稱質(zhì)量后，隨機(jī)取 10 尾魚，用 50 mg/L 丁香酚進(jìn)行麻醉處理，待魚側(cè)翻后，稱質(zhì)量測體長，將魚解剖，分離出胃腸道 (內(nèi)臟和肝均稱質(zhì)量并記錄)，用預(yù)冷 4 ℃氯化鈉注射液沖洗和濾紙吸干水分，置于 －40 ℃冰箱保存，用于粗酶液的制備。

1.4 生長性能分析

    每桶魚稱質(zhì)量測體長并采樣后，分別按以下公式計算增重率(WGＲ)、飼料系數(shù) (FCＲ)、內(nèi)臟比、肝體比 (HSI)、魚體豐滿度 (CF) 和存活率(SＲ)。

    FCＲ = 總投餌量/總增質(zhì)量

    尾絕對增質(zhì)量/g = 試驗結(jié)束尾均質(zhì)量 － 試驗開始尾均質(zhì)量

    WGＲ/% =(尾絕對增質(zhì)量/試驗開始尾質(zhì)量) ×100日增質(zhì)量/g = 尾相對增質(zhì)量/試驗天數(shù)

    CF = 體質(zhì)量 ×100/(體長)

    內(nèi)臟比/% = (內(nèi)臟質(zhì)量/魚體質(zhì)量) ×100

    HSI/% = (肝質(zhì)量/魚體質(zhì)量) ×100

    SＲ/% =(試驗結(jié)束魚尾數(shù)/試驗開始魚尾數(shù)) ×100

1.5 粗酶液的制備和酶活力的測定

    取出樣品，分離出胃腸組織，分別剪取前、中和后 3 個腸段，稱每個腸段質(zhì)量，加入 10 倍體積(V/W) 的預(yù)冷氯化鈉注射液 (4 ℃)，并在冰水浴中勻漿 10 min。勻漿液用高速冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心(4 ℃、1 萬 r/min、10 min)，取上清液 (即消化酶粗提液) 低溫保存待檢。

    胃腸蛋白酶活性測定參考 QB/T 1803—93。吸光值用 UV －8100 型分光光度計。

    腸道二糖酶活性測定均采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒，按說明書操作，吸光值用UV －8100 型分光光度計。

1.6 數(shù)據(jù)處理

    試驗數(shù)據(jù)用 Excel 和 SPSS 19. 0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計。對數(shù)據(jù)做單因素方差分析 (One － wayANOVE)，結(jié)果以平均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示，其中日采食量、日增質(zhì)量和 WGＲ 等用均值表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 海帶多糖對斜帶石斑魚生長性能的影響

    從表 2 可見: 與 CK 組相比，試驗組末均質(zhì)量和 WGＲ 均有所提高，其中 F1 和 F2 組末均質(zhì)量分別比 CK 組高 17. 5% 和 13. 0%，差異顯著 (P ＜0. 05)，WGＲ 分別比 CK 組高 19. 25% 和 16. 6%，差異顯著 (P ＜0. 05)。與 CK 組相比，試驗組末體長均無顯著差異 (P ＞ 0. 05)。添加量為 0. 5% 時，日采食量、CF 和內(nèi)臟比均顯著提高 (P ＜ 0. 05)，另外 2 組雖有提高，但差異不顯著 (P ＞0. 05); F1組 FCＲ 與 CK 組相比極顯著降低 (P ＜ 0. 01)，F(xiàn)2組顯著降低 (P ＜ 0. 05)，F(xiàn)3 組 FCＲ 雖有降低，但差異均不顯著 (P ＞0. 05)。

2.2 海帶多糖對胃腸道蛋白酶活力的影響

    從表 3 可見: 隨著海帶粗多糖添加量的增加，胃腸道部位的蛋白酶活力呈現(xiàn)降低的趨勢。F1 和F2 組的胃蛋白酶活力顯著高于 CK 組 (P ＜ 0. 05)，F(xiàn)3 組比 CK 組高，但差異不顯著 (P ＞ 0. 05); F1與 F3 組相比，差異顯著 (P ＜ 0. 05)。F1 和 F2 組腸蛋白酶活力顯著高于 CK 組 (P ＜0. 05)，組間呈降低趨勢，但差異不顯著 (P ＞0. 05)。

2.3 海帶多糖對斜帶石斑魚各腸段二糖酶活性的影響

2.3.1 海帶多糖對斜帶石斑魚各腸段麥芽糖的影響

    從表 4 可見: 與 CK 組相比，各個海帶粗多糖添加組斜帶石斑魚的各個腸段的麥芽糖酶活性均有一定程度的增加，其中，F(xiàn)1 組前腸、中腸和后腸的麥芽糖酶活性均極顯著高于 CK 組 (P ＜0. 01); F2組各個腸段的麥芽糖酶活性均顯著高于 CK 組 (P ＜0. 05); F3 組各個腸段的麥芽糖酶活性均高于 CK組，但差異不顯著 (P ＞0. 05)

2.3.2 海帶多糖對斜帶石斑魚各腸段乳糖的影響

    從表 4 可見: F1 和 F2 組中腸和后腸段的乳糖酶活性與 CK 組相比有顯著提升 (P ＜0. 05)，前腸與 CK 組相比，其乳糖酶活性均高于 CK 組，但差異不顯著 (P ＞ 0. 05); F3 組各腸段的乳糖酶活性均高于 CK 組，但差異也都不顯著 (P ＞0. 05)。與海帶粗多糖對斜帶石斑魚麥芽糖酶活性的影響相比，其影響相對小一些。

2.3.3 海帶多糖對斜帶石斑魚各腸段蔗糖的影響

    從表 4 可見: 與 CK 組相比，海帶粗多糖各組斜帶石斑魚蔗糖酶活性均有一定水平的提高，添加量為 1. 0%時，其前腸和中腸蔗糖酶活性顯著高于CK 組 (P ＜ 0. 05)，除此外，其余海帶粗多糖各組各腸段的蔗糖酶活性雖高于 CK 組，但差異均不顯著 (P ＞0. 05)。由此可見，海帶多糖雖在一定程度上能提高斜帶石斑魚各腸段的蔗糖酶活性，但與麥芽糖酶和乳糖酶相比，其影響較小，可以判斷，在試驗中，海帶粗多糖對斜帶石斑魚蔗糖酶活性的影響大體不顯著 (P ＞0. 05)。

3 討論

    試驗中選用海洋天然活性多糖作為斜帶石斑魚的飼料添加劑，結(jié)果表明，海帶多糖具有促進(jìn)斜帶石斑魚生長、提高飼料營養(yǎng)物質(zhì)的利用率和降低FCＲ 等作用，與國內(nèi)外的研究結(jié)果一致: 在飼料中添加 300 mg/kg 的海帶多糖發(fā)現(xiàn)，斷奶仔豬的 WGＲ 極顯著的提高了（P ＜0. 01); 向梟等在齊口裂腹魚的日糧中添加黃芪多糖發(fā)現(xiàn)，齊口裂腹魚的生長狀況和 FCＲ 得到明顯改善; 劉洪麗等在奧尼羅非魚的日糧中添加馬尾藻多糖發(fā)現(xiàn)，0. 1% 的添加量能極顯著提高奧尼羅非魚的增長率和生長速度，極顯著降低 FCＲ (P ＜0. 01)。試驗中，與 CK 組相比，F(xiàn)1 和 F2 組均顯著提高了斜帶石斑魚日增質(zhì)量和降低 FCＲ ( P ＜0. 05)，說明海帶多糖作為魚飼料添加劑可有效提高斜帶石斑魚的生長性能。

    多糖對于動物消化酶活性的影響，國內(nèi)外也有一定報道。其作用機(jī)制可能為生物活性多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用，能極大提高動物機(jī)體免疫活力，極大發(fā)揮動物體生長潛能，進(jìn)而提高機(jī)體消化酶活性，促進(jìn)動物生長。斜帶石斑魚屬肉食魚種，對蛋白質(zhì)具有很強(qiáng)的消化能力，消化主要發(fā)生在幽門盲囊、胃和腸 (消化活力幽門盲囊 ＞ 胃 ＞ 腸)，于腸道黏膜二糖酶活性的研究，鮮有報道，但對蛋白酶和淀粉酶研究較深入。試驗結(jié)果表明，海帶多糖能顯著提高斜帶石斑魚胃腸道蛋白酶活力和腸黏膜麥芽糖酶活力 (P ＜ 0. 05)，但于乳糖和蔗糖酶影響較弱，這可能與淀粉酶活性有關(guān)。淀粉酶能催化淀粉分解成葡糖糖和麥芽糖等，淀粉酶活力提高，進(jìn)而促使麥芽糖生成量增加，正反饋提高麥芽糖的活性。陳勇等研究發(fā)現(xiàn)，0. 25% 的殼聚糖能顯著提高異育銀鯽的蛋白酶和淀粉酶活性 (P ＜0. 05)。試驗中，海帶多糖可能具有提高淀粉酶活性的作用，進(jìn)而提高麥芽糖酶活性，但尚需深入的研究考證。

4 結(jié)論

    海帶多糖作為一種來源廣泛且作用豐富的天然活性物質(zhì)已廣為人知。試驗結(jié)果表明，海帶多糖具有促進(jìn)斜帶石斑魚生長，提高飼料利用率等效用，但其功效不是隨著多糖添加量增加而更明顯，相反，添加量越高，其作用反而會降低，試驗中，多糖添加量以 0. 5%為最適添加量。