本文以滸苔為研究對(duì)象,探究了釀酒酵母菌發(fā)酵滸苔純粉的最佳工藝條件以及滸苔添加比例與微生物發(fā)酵對(duì)幼刺參生長、消化和非特異性免疫的影響,并摸索出滸苔生物飼料的制備工藝,驗(yàn)證了滸苔生物飼料在幼刺參養(yǎng)殖中的作用。

      實(shí)驗(yàn)室研究在黃海水產(chǎn)研究所水產(chǎn)動(dòng)物營養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室開展。主要研究?jī)?nèi)容如下:

    1、為確定釀酒酵母菌發(fā)酵滸苔純粉的最佳條件,以滸苔純粉為發(fā)酵底物,釀酒酵母菌菌液為發(fā)酵液,按照3×4正交實(shí)驗(yàn)方案,利用釀酒酵母菌對(duì)滸苔純粉進(jìn)行發(fā)酵。結(jié)果表明:各組發(fā)酵產(chǎn)物中的菌株濃度2.2×106-9.2×107之間,且產(chǎn)物中還原性糖和可溶性蛋白含量均有變化。由此得出,采用釀酒酵母菌對(duì)滸苔純粉進(jìn)行發(fā)酵是可行的,且最佳發(fā)酵條件為:60%含水量,10%接種量,2 d和35℃。

    2、為探究滸苔添加比例與微生物發(fā)酵對(duì)幼刺參生長、消化和非特異性免疫的影響,實(shí)驗(yàn)以滸苔、馬尾藻、石莼、扇貝邊等為原料,配制成滸苔添加比例分別為0、10%、20%、30%和40%的5種飼料。將每種飼料均分成2份,其中1份利用釀酒酵母菌發(fā)酵,實(shí)驗(yàn)最終得到10種實(shí)驗(yàn)飼料。將上述飼料飼喂初始體重平均為(3.94±0.46)g的幼刺參46d。結(jié)果表明:(1)在未發(fā)酵組中,隨著滸苔添加比例的提高,幼刺參增重率(WGR)、特定生長率(SGR)和飼料效率(FE)有升高的趨勢(shì),以40%添加組最優(yōu);而發(fā)酵組幼刺參WGR、SGR和FE先升高后降低,以30%添加組最優(yōu)。添加30%與40%滸苔對(duì)WGR、SGR和FE的影響差異不顯著(P0.05),且均顯著高于添加10%滸苔組(P0.05)。(2)在未發(fā)酵組中,隨著滸苔添加比例的提高,腸道纖維素酶活力呈先上升后下降的趨勢(shì);而發(fā)酵組中,腸道纖維素酶活力呈不斷上升趨勢(shì)。同一添加比例下,發(fā)酵組的腸道纖維素酶活力高于未發(fā)酵組,且在添加比例為10%、20%、40%時(shí)差異顯著(p0.05)。(3)滸苔添加比例與微生物發(fā)酵對(duì)幼刺參體腔液中酸性磷酸酶(acp)、堿性磷酸酶(akp)和超氧化物歧化酶(sod)活力均無顯著促進(jìn)作用(p0.05)。由此得出,幼刺參飼料中滸苔的適宜添加比例在30%-40%之間;對(duì)添加滸苔的飼料進(jìn)行微生物發(fā)酵可以適當(dāng)提高幼刺參腸道中纖維素酶(cellulase)活力。

    3、為探究堿性蛋白酶與微生物發(fā)酵在滸苔生物飼料制備過程中的最優(yōu)條件,先采用單因素梯度實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),對(duì)堿性蛋白酶添加量進(jìn)行初步摸索,再采用3×4正交設(shè)計(jì)(以酶添加比例、含水量、時(shí)間和接種量四個(gè)因素,三個(gè)水平),利用釀酒酵母菌發(fā)酵滸苔飼料。結(jié)果表明:(1)經(jīng)堿性蛋白酶水解后,可溶性蛋白總氨基酸含量存在著顯著性的變化(p0.05);其中,8‰組中的氨基酸總量,與6‰組和10‰組無顯著性差異(p0.05),而與明顯高于其他兩組(p0.05)。(2)四個(gè)實(shí)驗(yàn)因素對(duì)還原性糖含量變化作用大小順序分別是時(shí)間、含水量、接種量和酶添加比例;發(fā)酵條件最優(yōu)組合是24h、80%含水量、16%接種量和6‰酶添加比例。由此得出,在堿性蛋白酶添加比例為6‰、含水量80%、接種量16%和溫度為30℃下,釀酒酵母菌發(fā)酵滸苔飼料能夠得到最佳效果。

    4、為探究不同滸苔型飼料對(duì)幼刺參生長、消化和非特異性免疫的影響,實(shí)驗(yàn)以未處理、堿性蛋白酶水解、微生物發(fā)酵、先水解再發(fā)酵和鮮滸苔型飼料先酶解再發(fā)酵等五種方式處理3中的飼料,得到五組滸苔型飼料(分別為對(duì)照組、發(fā)酵組、酶解組、復(fù)合組和流體組),投喂初始體重為(1.92±0.02)g/頭的刺參,為期42d。結(jié)果表明:(1)五組飼料對(duì)幼刺參出皮率(r)均無顯著影響(p0.05);復(fù)合組與流體組幼刺參存活率(sr)要明顯高于酶解組(p0.05);復(fù)合組中幼刺參wgr與對(duì)照組和發(fā)酵組無顯著性差異(p0.05),但明顯小于流體組(p0.05)且顯著高于酶解組(p0.05)。各組幼刺參sgr、fc與wgr規(guī)律與sr基本一致。(2)實(shí)驗(yàn)2周、4周和6周時(shí),發(fā)酵組淀粉酶(AMS)活力與對(duì)照組無顯著差異(P0.05),但顯著高于酶解組(P0.05),且明顯低于流體組和復(fù)合組(P0.05)。實(shí)驗(yàn)2周、4周時(shí),復(fù)合組纖維素酶(Cellulase)活力顯著高于對(duì)照組和酶解組(P0.05);實(shí)驗(yàn)6周時(shí),復(fù)合組Cellulase活力顯著高于其他各組(P0.05)。實(shí)驗(yàn)2周時(shí),各組之間的胰蛋白酶(TRY)活力無顯著性差異(P0.05);4周時(shí),發(fā)酵組中的TRY活力明顯高于酶解組(P0.05),并顯著低于其他三組(P0.05);6周時(shí),復(fù)合組中的TRY活力與流體組和對(duì)照組無顯著性差異(P0.05),而明顯高于酶解組和發(fā)酵組(P0.05)。(3)五組幼刺參體腔液中的ACP、AKP和SOD活力之間有著顯著的差異(P0.05)。在各組的ACP中,流體組中的ACP活力最大,與復(fù)合組無明顯差距(P0.05),但顯著高于其他三組(P0.05)。在各組的AKP中,流體組和復(fù)合組中的AKP活力顯著高于酶解組和對(duì)照組(P0.05),與發(fā)酵組無明顯差異(P0.05)。而在各組的SOD活力中,流體組與其他各組均無顯著差異(P0.05)。由此得出,幼刺參攝食流體組滸苔生物飼料能夠得到良好的生長效果,適當(dāng)改善其消化酶活力,維持其正常的生理健康。該結(jié)果表明了鮮滸苔作為刺參飼料成分的可靠性,為減輕處理滸苔工作量,提高滸苔利用率提供了理論依據(jù)和實(shí)踐方法。